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    ELISA试剂盒(BA法)放大系统

    发布时间: 2015-09-28  点击次数: 3029次

    1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。
    应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,ELISA试剂盒经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
    BA-ELISA分为:
    1,LAB法即酶联亲和素-生物素标记法(Labeledavidin-biotin,简称LAB)。用辣根过氧化物酶直接标记亲和素,用生物素标记第二抗体。
    2,ABC法即酶联亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex,简称ABC)。如用链霉亲和素(Streptavidin),则形成链霉亲和素-酶联生物素复合物(Streptavidin-Biotin-PeroxidaesComplex,简称SABC)。在ABC法中,用生物素标记第二抗体,ELISA试剂盒又用生物素标记过氧化物酶。在使用前30min,亲和素与酶联生物素以1:1的比例混匀。1个亲和素分子结合3个生物素分子,亲和素剩下的1个结合点与标记第二抗体的生物素结合,亲和素起桥联作用。ABC法比PAP(Peroxidase-antiperoxidasetech-nique)法敏感几十倍。
    3,BAB法即酶联亲和素-生物素桥法(Bridgedavidin-biotin,简称BAB)。用游离亲和素(或链霉亲和素)作为桥联剂,将生物素标记后开成的复合物与酶标记生物素连结起来,然后进行样品的检测。由于标记抗体分子上连有多个生物素,因此,ELISA试剂盒zui终形成的抗原-生物素标记抗体-亲和素-酶标生物素复合物可积聚大量的酶分子;加入相应底物后,产生强烈的酶促反应,大幅度提高检测的灵敏度。
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